妥布霉素眼膏需涂抹于结膜囊内。将下眼睑轻轻下拉形成囊袋，将约1厘米长的药膏挤入囊袋中，避免药膏管口直接接触眼球或眼睑。涂药后闭眼1-2分钟，促进药物均匀分布。
1、结膜囊给药：结膜囊是眼睑与眼球之间的潜在腔隙，可容纳药膏并缓慢释放药物成分。操作时需清洁双手，头部后仰，用食指固定下眼睑皮肤向下牵拉，暴露下方结膜囊。药膏应平行挤入囊内，避免垂直挤压导致眼球刺激。
2、眼睑边缘处理：若存在睑缘炎或麦粒肿，可将少量药膏沿睫毛根部涂抹。需注意药膏可能引起暂时性视物模糊，建议夜间睡前使用。细菌性睑缘炎患者需连续用药7天，配合热敷促进腺体分泌物排出。
3、角膜溃疡辅助：严重角膜感染时，医生可能指导在溃疡面直接点涂药膏。需在裂隙灯指导下操作，严格无菌技术。角膜涂药后需加压包扎患眼，防止药膏流失。每日用药不超过3次，避免影响角膜上皮修复。
4、术后创口保护：眼科手术后常在结膜缝合处涂抹药膏形成保护膜。青光眼滤过术后使用可预防滤过泡感染，需避开引流口位置。角膜移植术后涂药需避开缝线区，采用"三点法"在颞上、鼻上、下方结膜囊分次给药。
5、泪道感染处理：急性泪囊炎发作期，可向泪小点内注入药膏。需先挤压泪囊区排脓，再用钝头针管缓慢推注。注药后指压泪囊区5分钟，促进药物向鼻泪管扩散。慢性泪囊炎患者需联合泪道冲洗，每周2次。
使用妥布霉素眼膏期间应避免佩戴隐形眼镜，防止药物成分沉积。游泳后需重新给药，维持有效药物浓度。糖尿病患者需监测眼压变化，糖皮质激素复合制剂可能影响葡萄糖代谢。储存时保持药膏管口清洁，开封后有效期不超过4周。
